一、微生物碳利用效率的概念及其环境意义

微生物碳利用效率(CUE):微生物分配给生长的碳量占吸收总碳量的比率,体现了微生物合成代谢和分解代谢之间的平衡。


二、微生物碳利用效率测定的原理

设置18O标记处理以及加入等量自然丰度水的对照组,通过培养过后DNA中18O丰度的差值来判读加入土壤的标记水有多少进入了新产生的DNA中,由此估算微生物生长速率。


测定方法——18O-H2O培养法:


试样的准备:

收集200g左右田间土壤样品,混匀,将其中的大约100g土壤鲜样通过2mm 孔径筛,去除石头和肉眼可见的根等杂质,装入聚乙烯样品袋备用。


预培养:

土壤野外采回后迅速过2mm筛,去除土壤内石块、根系、凋落物等;


烘干法测量土壤含水量土壤;

尽快将过筛后土壤熏蒸浸提法测量微生物MBC;

(1) 田间持水率的测定

调整土壤含水量到60%田间持水量(WHC,water holding capacity);

将土壤放入实验所需温度培养箱进行预培养,预培养时间遵照实验设计

(2)预培养土样控水处理


18O标记培养

一个样本一个对照组,或根据样本情况挑选20%样品做对照

土壤DNA的提取

野外采集土壤带回实验室迅速分装冻干提取DNA,并测得DNA含量。


18O丰度测定

吸取DNA提取液于洁净的银囊(已称重)中并置于60℃烘箱中干燥整夜后(称重)包好,用质谱仪测定18O丰度和总氧含量。


MBC测定

氯仿熏蒸提取法...

计算

               

添加不同丰度示踪剂后,土壤微生物 DNA 的18O原子百分超(APE-18O) 分别与土壤水(a) 和O2 (b) 的APE-18O的函数。